尿微量白蛋白测定在2型糖尿病的应用

　　糖尿病肾病是糖尿病最严重的慢性并发症之一，在患者尚未出现尿蛋白之前对其进行早期诊断和采取有效的治疗与监控，可以有效的预防糖尿病并发症的发生和发展［1］。目前肾损伤诊断多以尿素氮、肌酐、尿蛋白作为检测指标，但这些指标难以发现早期肾损伤，上述指标正常时，其中有相当比例的2型糖尿病患者已发生微量白蛋白尿，这种潜伏的肾损伤过往难以早期发现，往往错过早期治疗时机。近几年人们对尿微量白蛋白检测有了深进的熟悉，被称为20世纪80年代对糖尿病学的两大贡献之一。检测有放射免疫法(RIA)、酶联免疫吸附法(ELISA)、免疫比浊法等。本文以时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)检测2型糖尿病尿尿蛋白阴性患者尿微量白蛋白。报告如下。

　　1 材料和方法

　　1．1 仪器与方法

　　尿微量白蛋白测定用时间分辨荧光免疫分析法配套试剂，苏州新波生物有限公司提供，在上海新波ANYTEST2000时间分辨荧光免疫检测分析仪上测定，按说明书严格操纵。尿肌酐测定采用苦味酸法，试剂盒购于中生北控公司。仪器应用荷兰威图SLACTRA2全自动生化分析仪。尿标本预先用生理盐水30倍稀释测定。尿蛋白定性用长春迪瑞H10尿液分析仪及配套试纸条，所有试剂按规定蕴躲，在有效期内使用，严格按说明书操纵。

　　1．2 对象

　　对照组60例(男33例，女27例)，均匀年龄45．2岁(28岁~62岁)，为健康体检者，均排除高血压、糖尿病及其他和肾病有关病史。2型糖尿病组52例(男28例，女24例)，选自我院门诊及住院患者，均符合WHO诊断标准，均匀年龄48岁(20岁~72岁)，病程2 a~21 a。尿常规分析蛋白定性均为阴性。

　　1.3 标本

　　对照组、患者组均留取新鲜晨尿测定微量白蛋白及肌酐，以微量白蛋白(μg/ml)、微量白蛋白／肌酐比值(mg/g)报告，所有标本均先离心后当日测定。

　　2 结果与讨论

　　2．1 计算尿微量白蛋白正常值

　　以尿微量白蛋白mALB计算，范围1．50 μg／ml～26．3 μg／ml，均值14．7 μg／ml。以微量白蛋白肌酐比值mALB/Cr(mg/g)计算，范围2．2 mg／g~22．1 mg／g，均值8．19 mg/g;因尿白蛋白值呈非正态分布，低值无临床意义，所用方法、试剂、仪器不同，参考值范围也有差别。一般在建立参考范围时以百分位数法按单侧值95％上限确定［2］。

　　2．2 微量尿蛋白含量

　　2型糖尿病组52例糖尿病患者按尿中微量白蛋白含量分组，正常者22例，占42．3％，增高者30例，占57．7％。病程越长，尿微量白蛋白增高者所占比例越高。2型糖尿病尿蛋白阴性患者尿微量白蛋白与正常对照组间比较，采用t检验，差异有明显性(P<0．01)。结果如表1。表1 2型糖尿病患者尿微量白蛋白(mALB)水平与健康人的比较（略）

　　测定尿微量白蛋白最理想的方法是留取24 h标本，但因留取困难，在实际应用上受到限制。随机尿测定是目前最常用、最易行的方法。但应同时测定肌酐，因逐日肌酐排除量相对恒定，可避免尿量变化对结果的影响。而晨尿影响因素小，结果相对比较恒定。

　　近年来，尿微量白蛋白测定已成为早期肾损伤监测和追踪的重要生化指标［2~4］，用时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)检测尿微量白蛋白，与其他方法一样，对早期肾损害的诊断远远优于常规定性或半定量试验。用时间分辨荧光免疫分析法检测尿微量白蛋白是诊断2型糖尿病早期肾损伤可靠、灵敏的生化指标。

　　尿微量白蛋白排出量受人的体位、运动、血压、蛋白摄进量的影响，发热、精神紧张可使尿微量白蛋白分泌增加；某些药物可通过生物学影响使尿排出尿微量白蛋白增加。实验时要考虑到各种影响因素。尽量建立一个干净无尘的实验室环境。不要混用不同批号的试剂，不要使用过期试剂。使用前，实验缓冲液、待测标本和微孔反应板必须恢复到室温。吸取增强液或铕标记物时，请使用专用吸头，以避免尘土污染。使用医用蒸馏水或往离子水配制洗液，并混匀。使用干净的一次性容器配制铕标记物，应避免铕标记物稀释液进进铕标记物原液中。同时应建立自己的实验参考值范围。